Egy 12 hetes allulózban gazdag diéta metabolikus és endokrin hatásai
Store AlluloseEz a publikáció, a 'Cukorbetegség, Étrend és Egészségügyi Állapotok' különszámában, 2024. június 10.-én jelent meg.
Forrás: MDPI
Szerzők: Kevin B. Cayabyab 1, Marley J. Shin 1, Micah S. Heimuli 1, Iris J. Kim 1, Dominic P. D'Agostino 2 ORCID, Richard J. Johnson 3, Andrew P. Koutnik 4, Nick Bellissimo 5, David M. Diamond 6 ORCID, Nicholas G. Norwitz 7, Juan A. Arroyo 1, Paul R. Reynolds 1, ORCID és Benjamin T. Bikman 1 *
1.) Sejtbiológiai és Élettani Tanszék, Brigham Young Egyetem, Provo, UT 84602, USA
2.) Molekuláris Farmakológiai és Élettani Tanszék, Dél-Floridai Egyetem, Tampa, FL 33602, USA
3.) Colorado Egyetem Orvostudományi Tanszéke, Aurora, CO 80045, Amerikai Egyesült Államok
4.) Sansum Diabétesz Kutatóintézet, Santa Barbara, CA 93105, USA
5.) Táplálkozástudományi Kar, Toronto Metropolitan Egyetem, Toronto, ON M5S 1A8, Kanada
6) Pszichológiai Tanszék, Dél-Floridai Egyetem, Tampa, FL 33602, USA
7.) Harvard Orvosi Egyetem, Boston, MA 02115, Amerikai Egyesült Államok
* A szerző, akihez a levelezést címezni kell.
Absztrakt
A 2-es típusú cukorbetegség (T2D) és az elhízás globális növekedése innovatív étrendi beavatkozásokat tesz szükségessé.
Ez a tanulmány kimutatta az allulózról, hogy csökkenti a vércukorszintet, egy étrend által kiváltott elhízást okozó T2D patkánymodellben.
12 hét alatt azt feltételeztük, hogy az allulóz-kiegészítés javítja a testsúlyt, az inzulinérzékenységet és a glikémiás kontrollt.
Eredményeink azt mutatták, hogy az allulóz enyhítette a magas zsír- és cukortartalmú étrendek káros hatásait, beleértve a csökkent testsúlynövekedést és a javuló inzulinrezisztenciát.
Az allulóz-csoport alacsonyabb ételfogyasztást és a glukagonszerű peptid-1 (GLP-1) szintjének növekedését mutatta, fokozva a glükózszabályozást és az étvágyszabályozást.
Ezenkívül az allulóz megakadályozta a máj trigliceridjeinek felhalmozódását, és elősegítette a mitokondriális szétkapcsolódást a zsírszövetben.
Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az allulóz-kiegészítés javíthatja az anyagcsere-egészségügyi markereket, így ígéretes étrendi összetevővé válik az elhízás és a T2D kezelésében.
További kutatásokra van szükség az allulóz hosszú távú előnyeinek és mechanizmusainak feltárásához az anyagcsere-betegségek megelőzésében és kezelésében.
Ez a tanulmány alátámasztja az allulóz potenciális lehetőségét, mint biztonságos és hatékony beavatkozást az anyagcsere-egészség javítására az étrendi túlfogyasztás összefüggésében.
Kulcsszavak: inzulinrezisztencia ; cukorbetegség ; elhízás ; mitokondrium ; allulóz
1. Bevezetés
A 2-es típusú cukorbetegség (T2D) és az elhízás növekvő globális előfordulása jelentős közegészségügyi kihívást jelent, ami szükségessé teszi innovatív étrendi stratégiák feltárását e betegségek enyhítése érdekében.
A 2-es típusú cukorbetegség (T2D) és az elhízás világszerte burjánzó járványa az innovatív és hatékony beavatkozások szüntelen keresését igényli.
Az allulóz (d-pszikóz) egy ritka természetes cukor, amely kis mennyiségben természetesen megtalálható bizonyos gyümölcsökben.
Az allulóz a fruktóz édességét kínálja, mégis metabolikusan eltér; a fruktóz C-3 epimerje, amely a fruktózzal ellentétben nincs hatással a glükózra vagy az inzulinra.
Továbbá, a fruktózzal ellentétben az allulóz nem szubsztrátja a de novo lipogenézisnek, és nem vált ki gátló hatást a zsírsav-oxidációra [ 1 ].
Összességében ezek az okok vonzó jelöltté teszik az allulózt az anyagcserezavarok étrendi kezelésében, mind az étrendi fruktóz kiszorítása, mind pedig a feltételezett metabolikus előnyök biztosítása révén [ 1 , 2 , 3 ].
A hagyományos cukrokkal ellentétben az allulóz nagyrészt a vékonybélben felszívódik, és anélkül ürül ki, hogy teljesen metabolizálódna [ 4 ], így alacsony kalóriatartalmú alternatívát kínál a szacharóz és a magas fruktóztartalmú kukoricaszirup helyett, más alacsony vagy nulla kalóriatartalmú édesítőszerek mellett [ 5 ].
A legújabb, embereken végzett vizsgálatok kiemelték az allulóz lehetséges előnyeit, beleértve a jobb glikémiás kontrollt és a csökkent elhízást, a hagyományos cukrokhoz kapcsolódó káros metabolikus hatások nélkül [ 1 , 6 , 7 , 8 ].
Azonban, bár egyértelműen fokozza az endogén glukagonszerű peptid-1 (GLP-1) felszabadulását [ 9 ], amelyet a fogyókúrás gyógyszereknél nagymértékben kihasználnak [ 10 , 11 ], ezen jótékony hatások mögött meghúzódó mechanizmusok még teljes mértékben tisztázásra várnak.
Továbbá, míg az emberi vizsgálatok kritikus fontosságúak, az állatmodellek, különösen a 2-es típusú cukorbetegség és az elhízás rágcsálómodelljei, értékes lehetőséget kínálnak az allulózra adott fiziológiai, metabolikus és molekuláris válaszok kontrollált környezetben történő vizsgálatára.
Ez a 12 hetes vizsgálat az allulóz étrendi kiegészítésének hatásait vizsgálta étrend által kiváltott elhízás és 2-es típusú cukorbetegség patkánymodelljében.
Azt feltételeztük, hogy az allulóz kiegészítése jelentős javulást eredményez a testsúlyban, az inzulinérzékenységben és a glikémiás kontrollban a standard, allulóz nélküli étrenddel etetett kontrollállatokhoz képest.
Ezenkívül megvizsgáltuk azokat a lehetséges mechanizmusokat, amelyek révén az allulóz kifejti hatását, beleértve az adipocita-anyagcserére és az adipokintermelésre, a máj tápanyag-gazdálkodására és a gyulladásos markerekre gyakorolt hatását.
Az allulóz metabolikus hatásainak feltárásával egy jól bevált 2-es típusú cukorbetegség és elhízás állatmodellben, ez a tanulmány hozzájárul az allulóz biztonságos és hatékony étrendi beavatkozásként való alkalmazását alátámasztó egyre növekvő szakirodalomhoz, amely ezen állapotok kezelésében alkalmazható.
A kutatás eredményei jelentős következményekkel járhatnak az étrendi ajánlások, az élelmiszeripari gyakorlatok és a 2-es típusú cukorbetegség és az elhízás etiológiáját célzó új terápiás stratégiák kidolgozása szempontjából.
A tanulmány célja az volt, hogy megerősítse az allulóz nyugati étrend egyes metabolikus hatásainak enyhítésére gyakorolt hatásáról szóló korábbi eredményeket, és kiegészítse ezt a zsírszövet-fiziológiára és a mitokondriális bioenergetikára jellemző eredmények figyelembevételével.
2. Anyagok és módszerek
2.1. Állatok
Tizenkét hetes nőstény és hím Wistar patkányokat vásároltunk a Jackson Laboratories-tól (Bar Harbor, ME, USA), és 22 ± 1 °C-on, 12 órás fény-sötétség cikluson tartottuk őket.
Az állatokat véletlenszerűen négy csoportra osztottuk, és külön-külön helyeztük el őket ( n = 10; 5 nőstény, 5 hím) egy 12 hetes vizsgálat során a következőképpen: standard laboratóriumi táp steviával (Stevita Naturals, Kennendale, TX, USA), nyugati diétás táp steviával, standard laboratóriumi táp allulózzal, vagy nyugati diétás táp allulózzal.
Az allulózt (allSWEET® ) az Anderson Advanced Ingredients (Irvine, CA, USA) biztosította.
Az állatok szabadon hozzáférhettek az élelemhez és a vízhez.
A nyugati diéta a Research Diets D12266B (New Brunswick, NJ, USA) volt, amely szacharózt, telített zsírt (vajat) és többszörösen telítetlen zsírokat (kukoricaolaj) tartalmazott.
A steviát és az allulózt ivóvízben kapták, és minden állat naponta 30 ml steril vízhez jutott hozzá, amely vagy 0,1 ml steviát (az allulózhoz illő édesítéssel), vagy 3% allulózt tartalmazott (a napi körülbelül 1,9 g/kg/nap adag eléréséhez), ahogyan azt korábban már elvégezték [ 12 ].
A protokoll során négyhetente vért vettek a farokvénából egy 8 órás böjtöt követően a folyamatos hormon- (inzulin és GLP-1) és glükózanalízishez.
A 12 hetes protokollt követően az állatokat toleranciavizsgálatokhoz használták, majd szövetmintavétel céljából feláldozták a további elemzéshez (lásd alább).
Minden munkát a Brigham Young Egyetem Intézményi Állatgondozási és Felhasználási Bizottsága (IACUC; 23-1222) hagyott jóvá, és a Nemzeti Egészségügyi Intézetek Laboratóriumi Állatok Gondozására és Felhasználására vonatkozó Útmutatójában ismertetett eljárásoknak és előírásoknak megfelelően végeztek.
2.2. ATP mennyiségi meghatározása
Az ATP-koncentrációt ( n = 8 minden csoportban) ATPlite Luminescence Assay kit (Perkin Elmer; Waltham, MA, USA) segítségével mértük. A szöveteket ATP stabilizáló pufferben homogenizáltuk (három térfogatrész jéghideg PBS, amely 20 mM glicint, 50 mM MgSO4- et és 4 mM EDTA-t tartalmazott).
A homogenizátumokat ezután 1:5 arányban hígítottuk ddH2O-ban . Összesen 100 μL ATP stabilizáló puffert és 50 μL emlőssejt lízis puffert adtunk egy átlátszatlan, fehér, 96 lyukú lemezhez a standardokhoz használt lyukakba, majd 5 percig rázógépen ráztuk 25 °C-on és 700 fordulat/perc sebességgel.
Ezután a hígított minták 100 μL-ét nyitott lyukakba adtuk, és a standardok 10 μL-ét a fent említett ATP stabilizáló pufferhez adtuk.
Ezután a lemezt 5 percig rázógépen ráztuk 25 °C-on és 700 fordulat/perc sebességgel. Ezután 50 μL szubsztrátot adtunk minden egyes kútba (sötétben), és 5 percig rázógépen ráztuk 25 °C-on és 700 fordulat/perc sebességgel. A kútokban lévő oldatokat 10 percig sötétadaptációra hagytuk. A lumineszcenciát ezt követően Victor Nivo Multimode Plate Reader (Perkin Elmer) segítségével mértük, és az ATP-koncentrációt normalizáltuk a BCA protein assay-vel (Thermo Fisher Scientific; Waltham, MA, USA) mért fehérjekoncentrációhoz.
2.3. Mitokondriális légzés
A mitokondriális oxigénfogyasztási rátákat 37 °C-on, frissen izolált szövetből határoztuk meg Oroboros O2K Oxygraph (Oroboros, Innsbruck, Ausztria) készülékkel, MiR05 respirációs pufferrel, a korábban leírtak szerint [ 13 ].
Mielőtt a zsírszövetből származó mintákat az oxigráf respirométer kamráiba helyeztük, a mintákat 0,05 mg/ml szaponinban (Sigma-Aldrich, St. Louise, MO, USA) permeabilizáltuk MiR05-ben 30 percig 4 °C-on.
A permeabilizált szövet hozzáadása után a respirométer kamráit ~350 nmol/ml-re hiperoxigenizáltuk. Az oxigénfogyasztási rátákat a következő protokollal határoztuk meg: Az I. és II. komplexen keresztüli elektronáramlást glutamát + malát + szukcinát (10 mM, 2 mM és 10 mM) hozzáadásával támogattuk a szivárgásos oxigénfogyasztás (GMS) meghatározásához. A stabilizálást követően adenozin-difoszfátot (ADP) (2,5 mM) adtunk hozzá az oxidatív foszforilációval összefüggő oxigénfogyasztás meghatározásához. A respirációs protokoll befejezését követően a mintákat a kamrákból összegyűjtöttük, és -20 °C-on tároltuk további elemzés céljából.
A fehérjekoncentrációkat BCA assay-vel (Perkin Elmer) mértük, és a respirációs rátákat a fehérjekoncentrációhoz normalizáltuk.
2.4. Plazmafehérje-elemzés
A fehérjeizolálást RIPA pufferrel, proteázgátlókkal (Fisher Scientific) végzett homogenizálással végeztük. A teljes fehérjét BCA Protein Assay Kit (Fisher Scientific) segítségével mennyiségileg meghatároztuk, és 20 µg fehérjét használtunk aktív immunoblotolásos vizsgálathoz vagy fehérjék jellemzéséhez.
A mintákat egyedi rágcsáló antitest-tömbökből (Abcam, Cambridge, Egyesült Királyság) származó membránokra adtuk, amelyek specifikus C-reaktív protein, aktív GLP-1, inzulin, adiponektin és leptin elleni antitesteket tartalmaztak, és egy éjszakán át inkubáltuk, mielőtt visszanyertük és egy második antitest-tömb membránnal ismét inkubáltuk volna.
Ezután biotinilezett antitesteket adtunk minden membránhoz, és egy éjszakán át inkubáltuk, majd végül streptavidin-konjugált fluoreszcens jelölővel inkubáltuk a citokin expressziójának kimutatására.
A membránokat a korábban említett fluoreszcens képalkotó rendszerrel (LI-COR; Lincoln, NE, USA) képalkotó vizsgálatnak vetettük alá, majd az Image J 1.54h verziójával (US National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA) mennyiségileg meghatároztuk.
A jelintenzitásokat az egyes membránokon lévő pozitív kontrollokhoz hasonlítottuk, ahogyan azt korábban is tettük [ 14 ].
2.5. Toleranciatesztek
A toleranciavizsgálatot három fő eljárásra osztották, amelyeket külön napokon végeztek, legalább 48 órás felépülési időszakkal a tesztek között:
piruvát tolerancia teszt (PTT), glükóz tolerancia teszt (GTT) és inzulin tolerancia teszt (ITT).
Minden teszthez vérmintákat vettek a farokvénából a 0. (alapérték), 15., 30., 60. és 120. percben az injekció beadása után, hogy megmérjék a vércukorszintet egy kézi glükométerrel (Bayer Contour; Whippany, NJ, USA).
8 órás böjtöt követően a patkányok intraperitoneálisan nátrium-piruvát injekciót (2 g/testtömegkg) kaptak a plazma piruvátszintjének enzimatikus vizsgálattal történő mérése céljából.
Egy héttel a PTT után a GTT-t hasonló böjtölés után, majd intraperitoneálisan glükóz injekciót (2 g/testtömegkg) adtak be.
Az ITT-t a GTT után egy héttel végezték, és a patkányoknak intraperitoneálisan inzulint (0,75 U/kg) adtak be.
2.6. Májvizsgálat
Az eutanázia után májszövetmintákat gyűjtöttek, azonnal lemérték, majd jéghideg pufferben homogenizálták a triglicerid- és glikogéntartalom meghatározása céljából.
A máj trigliceridjeit triglicerid vizsgálati készlettel (ab65336; Abcam, Cambridge, Egyesült Királyság) mennyiségileg meghatározták a gyártó protokollja szerint.
A glikogénszinteket májglikogén vizsgálati készlettel (ab169558; Abcam) értékelték.
A triglicerid- és glikogéntartalmat a máj nedves tömegéhez normalizálták.
A májfunkció felmérésére az alanin-aminotranszferáz (ALT) és az aszpartát-aminotranszferáz (AST) plazmaszintjét mérték.
A vérmintákat az eutanázia után közvetlenül szívpunkcióval vették, a plazmát pedig 3000 g-vel 10 percig centrifugálással nyerték.
A plazma ALT- és AST-aktivitását kereskedelmi forgalomban kapható vizsgálati készletekkel (ab263883 és ab285264; Abcam) határozták meg.
2.7. Statisztikai elemzés
Az átlagértékeket ± SEM-et egyutas (egyszeri mérések esetén) vagy kétutas (időbeli mérések esetén) ANOVA-val, majd Student t- próbával értékeltük.
Az eredmények reprezentatívak, és a 0,05-nél kisebb p- értékűeket tekintettük szignifikánsnak.
A statisztikai elemzést a GraphPad Prism 7.0 szoftverrel végeztük.
3. Eredmények
A tanulmány egyik központi eredménye az allulóz testsúlyváltozásokra és táplálékfogyasztásra gyakorolt hatásának megértése volt, beleértve az ilyen változások közvetítő mechanizmusainak kiegészítését is.
A testsúly ( 1A. ábra ; hím átlagos kiindulási tömeg: 328 ± 17 g; nőstény átlagos kiindulási tömeg: 245 ± 12 g) szignifikánsan megnőtt a steviát tartalmazó nyugati diétán (WD) tartott állatoknál.
A súlygyarapodás azonban szignifikánsan kisebb volt a WD+allulóz csoportokban a WD+stevia csoporthoz képest.
Fontos megjegyezni, hogy nem figyeltek meg súlykülönbséget a steviát vagy az allulózt kapó patkányok között, amelyek a standard diétát (SD) kapták, ami arra utal, hogy az allulóz hatásai a nyugati diétára jellemzőek voltak.
Ezekkel az eredményekkel összhangban a WD+stevia csoportban a táplálékbevitel jelentősen megnőtt az SD+stevia csoporthoz képest ( 1B . ábra; hím átlagos kiindulási bevitel: 21 ± 3 g; nőstény átlagos kiindulási bevitel: 16 ± 2 g).
A WD+allulóz csoport ismét jelentős csökkenést mutatott a táplálékbevitelben a WD+stevia csoporthoz képest.
- ábra. Testtömeg, táplálékfogyasztás és endokrin változások 12 hétig tartó allulózfogyasztás során.
A 12 hetes vizsgálat során a patkányok számos jelentős változást mutattak.
Először is, az allulózfogyasztás csökkentette súlygyarapodást nyugati étrend mellett, ami a teljes táplálékfogyasztás csökkenésében tükröződött.
Az inzulin (C) és a glükóz (D) szintje, amelyeket a HOMA-IR E ) kiszámításához használtak, míg a WD+steviacsoportban szignifkánsan emelkedett, a WD-+allulóz csoportban normális volt (n=8).
A GLP-1 szintje szignifikánsan emelkedett a vizsgálat során mindkét allulózt fogyasztó csoportban ((F); n = 8). * p < 0,05; ** p < 0,005; *** 0,0005.
A testsúlyra gyakorolt hatásokkal összhangban az allulóz a nyugati étrenddel blokkolta a hiperinzulinémia ( 1C. ábra ), a hiperglikémia ( 1D. ábra ) és az inzulinrezisztencia kialakulását (a Homeostatic Model Assessment for Insulin Resistance (HOMA-IR) index alapján; 1E. ábra ) is, amelyet a WD+stevia csoportban figyeltek meg.
Érdekes megjegyezni, hogy az allulózzal nyújtott védelem az aktív glukagonszerű peptid-1 (GLP-1; 1F. ábra ) magasabb szérumszintjével járt együtt.
Megjegyzendő, hogy mindkét allulózcsoportban magasabb GLP-1-szintet figyeltek meg, de a testsúlyra és az anyagcsere-paraméterekre gyakorolt előnyt csak a WD+allulóz csoportban figyelték meg.
Az allulóz metabolikus hatásának jobb megértése érdekében a teljes test anyagcseréjére tolerancia teszteket végeztünk, nevezetesen glükóz, inzulin és piruvát teszteket ( 2A–C ábra ).
Intraperitoneális glükózterhelés esetén ( 2A ábra ) a WD+stevia csoport mutatta a legnagyobb glükóz választ, a teszt során végig szignifikánsan magasabb választ fenntartva a többi csoporthoz képest (ami a rosszabb inzulinrezisztenciával összhangban van).
Ezzel szemben a WD+allulóz csoport mérsékelt választ váltott ki.
Hasonló eredményt kaptunk az inzulin tolerancia teszttel ( 2B ábra ).
A piruvát tolerancia teszt elvégzésével azt is meghatároztuk, hogy a nyugati étrend súlyosbíthatja-e a glükoneogenezist.
A várakozásoknak megfelelően a WD+stevia csoport a glükoneogenezis jelentős stimulációját mutatta, a szérum glükózszintjének kifejezett emelkedésével a piruvát hatására.
Megjegyzendő, hogy az allulóz blokkolta a glükoneogenezist a nyugati étrendet kapó patkányokban ( 2C ábra ).
2. ábra. Glükóz-, inzulin- és piruvát tolerancia tesztek allulózzal etetett patkányokban.
A 12 hetes vizsgálat végén az állatokon tolerancia teszteket végeztek glükózra (( A ); 2 g/ttkg), inzulinra (( B ); 0,75 NE/ttkg) és piruvátra (( C ); 0,75 NE/ttkg) ( n = 6).
A görbe alatti terület (AUC) alapján a WD+steviával kezelt patkányok mutatták a legdrámaibb választ minden ingerre, a glükóz ( A ) és inzulin ( B ) tolerancia tesztekben tompa választ figyeltek meg a WD+allulóz esetében, míg a piruvátra ( C ) normális választ adtak . * p < 0,05; ** p < 0,005; *** p < 0,0005 vs. SD+stevia; # p < 0,05 vs. WD+stevia.
Az allulóz szempontjából elsődlegesen érdekes szövet a máj és annak eltérő tápanyag-feldolgozása, különösen a glikogén és a máj trigliceridjei.
Az allulózról kimutatták, hogy növeli a glikogéntartalmat laboratóriumi patkányok májában, ami némi tömegnövekedéssel jár, annak ellenére, hogy nincs hatással a májfunkcióra vagy a szövettanra [ 15 ].
Ezzel a jelentéssel összhangban mi is jelentős májméret- és glikogéntartalom-növekedést figyeltünk meg az allulózt kapó standard étrenden lévő állatoknál a steviát kapókhoz képest ( 3A,B ábra ).
Ismert, hogy a nyugati étrend növeli mind a glikogén-, mind a zsírszintet a májban, és a várakozásoknak megfelelően mind a glikogén-, mind a májzsír- (trigliceridek) szint jelentősen emelkedett volt a WD+stevia csoportban ( 3A–C ábra ).
A WD+allulóz csoport azonban, bár továbbra is magas glikogéntartalmat mutatott, nagyrészt védett volt a zsírmáj kialakulásától, és kevesebb májhypertrófia (súlygyarapodás) alakult ki nála a WD+stevia csoporthoz képest ( 3A–C ábra ).
Valójában a májfunkciós tesztek emelkedését csak a WD+stevia csoportban figyelték meg ( 3E ábra ).
Ezek a tanulmányok azt mutatják, hogy az allulóz védő hatással van a nyugati étrend májfunkciós eredményeire.
Minden csoportban a máj mitokondriális légzése változatlan maradt ( 3D. ábra ).
3. ábra. Jelemzés 12 hét allulózfogyasztást követően.
A májtömeget ( A ) a glikogén (B ) és a trigliceridek ( C) elemzése előtt mérték 12 hétig tartó nyugati diéta (WD) és standard diéta (SD) követése után, steviával vagy allulózzal kiegészítve az ivóvizet.
A mitokondriális légzést (lásd 2. szakasz ) mérték az étrend májfunkcióra gyakorolt közvetlen hatásának meghatározása érdekében.
A máj egészségének markereként a plazmában mennyiségileg meghatározták (E) az alanin (ALT) és az aszpartát-aminotranszferáz (AST) májenzimeket .N =8.*p<0,05;*p<0,005; *** p < 0,0005 vs. SD+stevia.
A testsúlyváltozások miatt a zsírszövet bioenergetikai folyamatainak jobb megértésére törekedtünk.
Korábban azt tapasztaltuk, hogy különféle étrendi beavatkozások képesek növelni a zsíranyagcsere sebességét [ 16 ]. Bár a mitokondriális légzésben ( 4A. ábra ) vagy az ATP-szintekben ( 4B . ábra) nem figyeltünk meg különbséget a csoportok között , azt láttuk, hogy az allulózcsoportokban szignifikánsan alacsonyabb volt a légzés és az ATP-szint aránya ( 4C. ábra ), ami nagyobb mitokondriális szétkapcsolásra utal.
4. ábra Zsírsejtek mitokondriális funkciójának elemzése 12 hetes allulózfogyasztást követően.
A mitokondriális légzést (( A ); lásd 2. szakasz ) a szubkután zsírszövetben mérték patkányokban 12 hétig tartó nyugati diéta (WD) és standard diéta (SD) után, steviával vagy allulózzal az ivóvízben.
Az ATP-t is meghatározták ( B ), és változók kombinációját használták annak meghatározására, hogy a szövetek milyen mértékben termeltek ATP-t a légzési ráta alapján ( C ). N = 7. * p < 0,05 vs. SD+stevia.
A májhoz hasonlóan a vese is egyedülállóan reagál az allulózra. A 12 hetes vizsgálat után elemeztük a vese tömegét ( 5A. ábra ) és a glikogénszinteket ( 5B. ábra ).
Bár a vese tömegében nem volt különbség a csoportok között, a vese glikogénszintjében enyhe, de szignifikáns különbség volt megfigyelhető mindkét allulózcsoportban.
5. ábra Veseanalízis 12 hét allulózfogyasztást követően.
A vese tömegét ( A ) a glikogénanalízis ( B ) előtt mérték 12 hét nyugati diéta (WD) és standard diéta (SD) után, steviával vagy allulózzal az ivóvízben. N = 10. * p < 0,05 vs. SD+stevia.
A beavatkozás általános gyulladásos és metabolikus állapotra gyakorolt hatásának mélyebb megértése érdekében számos metabolikus marker szintjét mértük, beleértve a C-reaktív proteint (CRP), az adiponektint és a leptint.
A WD+stevia csoport állatainál a CRP-szint több mint kétszeresére nőtt mindkét SD csoporthoz képest ( 6A. ábra ), ez a hatás a WD+allulóz csoportban tompult.
Az adiponektin szintje csak a WD+stevia csoportban volt szignifikánsan csökkent, míg a leptin általában hasonló, bár szerényebb tendenciát követett, mint a CRP esetében.
Az adiponektin/leptin arány, amely az adipocita méretének helyettesítője [ 17 ], csak a WD+stevia csoportban mutatott ki szignifikáns csökkenést ( 6B. ábra ).
6. ábra Hormonszintek allulózzal etetett patkányokban.
A 12 hetes vizsgálat végén plazmát gyűjtöttek nyugati diétán (WD) és standard diétán (SD) tartott rágcsálóktól, amelyek ivóvizében steviát vagy allulózt találtak.
Az analitok között szerepelt a C-reaktív protein (CRP), az adiponektin és a leptin ( A ). Az adiponektint és a leptint továbbá felhasználták az adipociták méretét tükröző arány létrehozásához ( B ). N = 6. * p < 0,05; ** p < 0,005; *** p < 0,0005 vs. SD+stevia.
4. Értékelés
E tanulmány eredményei hozzájárulnak az allulóz metabolikus hatásainak megértéséhez, különösen a testsúly, az ételfogyasztás, az inzulinrezisztencia és a szövetspecifikus metabolikus válaszok étrend által kiváltott változásainak kontextusában.
Megjegyzendő, hogy eredményeink alátámasztják a korábbi kutatások eredményeit, miszerint az allulózzal való kiegészítés a nyugati étrendben enyhíti a magas zsír- és cukortartalmú étrendekkel gyakran összefüggő káros hatásokat, mint például a megnövekedett testsúly és az inzulinrezisztencia, amelyek világszerte nyilvánvaló jelentőséggel bírnak [ 18 ].
Ezenkívül ez a munka új betekintést nyújt a GLP-1 dinamikájába, valamint az adipocita-változásokba és a mitokondriális funkcióba.
Munkánk kezdeti megfigyelései alátámasztják a korábbi munkákban találtakat.
Az a megfigyelés, hogy mind a WD+stevia, mind a WD+allulóz csoportban szignifikánsan megnőtt a testsúly a standard diétát (SD) követő társaikhoz képest, bár eltérő mértékben, rávilágít az étrendi cukrok és a testsúlyszabályozás közötti összetett kölcsönhatásra.
A WD+allulóz csoportban a kisebb mértékű súlygyarapodás az allulóz potenciális védőhatására utal az étrend által kiváltott elhízással szemben.
Ezt alátámasztják a korábbi kutatások is, amelyek azt mutatják, hogy az allulóz elhízásellenes hatással rendelkezik mind állatkísérletekben, elsősorban a zsigeri zsír csökkentése és a lipid-anyagcsere javulása révén [ 5 , 19 , 20 ].
Továbbá a WD+allulóz csoportban megfigyelt, a WD+stevia csoporthoz képest megfigyelt mérsékelt ételfogyasztási növekedés az allulóz étvágyszabályozó hatására utalhat.
Ez a megállapítás összhangban van azokkal a tanulmányokkal, amelyek arra utalnak, hogy az allulóz befolyásolhatja a jóllakottsági kaszkádot és csökkentheti az összkalóriabevitelt [ 21 ].
Az aktív glukagonszerű peptid-1 (GLP-1) szintjének jelentős növekedése az allulóz csoportokban egy másik mechanizmusra hívja fel a figyelmet, amelyen keresztül az allulóz kifejtheti metabolikus előnyeit.
Kimutatták, hogy a GLP-1, a glükózszabályozásban és az étvágyszabályozásban részt vevő hormon szintje emelkedik az allulóz bevitele által, fokozva a glükóztoleranciát és csökkentve a súlygyarapodást [ 9 , 22 ].
Míg mások kimutatták a fokozott GLP-1 szekréciót az allulózra adott válaszként [ 23 ], úgy véljük, hogy eredményeink az elsők, amelyek a megnövekedett GLP-1 szintről számolnak be egy adott állapotban, ami arra utal, hogy az allulóz tartós hatást vált ki, jóval a fogyasztási ponton túl is.
Az inzulin- és glükózszintek csoportok közötti eltérő válaszreakciói – ahol a WD+stevia csoport fokozatos emelkedést mutatott, míg a WD+allulóz csoport nem – tovább hangsúlyozza az allulóz jótékony szerepét a glükóz homeosztázis és az inzulinérzékenység modulálásában.
Ezek az adatok összhangban vannak azzal az elképzeléssel, hogy az allulóz javíthatja a glikémiás kontrollt mind a glükózlerakódás, mind a termelés révén, javítva az inzulinérzékenységet az izomba történő lerakódás fokozása és a glikogenózisból származó termelés csökkentése érdekében [ 1 , 20 ], valamint a szubsztrátverseny révén pozicionálisan csökkentve az enterális felszívódást [ 18 , 24 ].
A máj- és zsírszövet-elemzésünk tovább világítja meg az allulóz szövetspecifikus metabolikus hatásait, beleértve a mitokondriális funkció változásaira vonatkozó új eredményeket is.
Míg a máj trigliceridszintje csak a WD+stevia csoportban emelkedett, ami arra utal, hogy az allulóz megakadályozhatja a májzsír felhalmozódását, a jelentős glikogénfelhalmozódás az összes intervenciós csoportban, különösen az allulózcsoportokban, a tápanyag-felhasználási vagy -tárolási mechanizmusok eltolódását tükrözheti.
Ez a megállapítás részben magyarázhatja Liu és munkatársai [ 15 ] által megfigyelt eredményeket, akik az allulózzal etetett rágcsálók edzéskapacitásának javulásáról számoltak be.
Tekintettel arra, hogy mi és mások is védelmet nyújtunk az allulóz beépítésével az elhízás ellen, a zsírszövet mitokondriális bioenergetikai folyamatainak elemzésével kapcsolatos korábbi tapasztalatainkat felhasználva meghatároztuk az allulóz relevanciáját ebben a [ 13 , 25 ] folyamatban.
Mindkét allulózcsoport zsírszövetében nagyobb mértékű mitokondriális szétkapcsolást figyeltünk meg, ami az allulóz újszerű hatására utal ebben a folyamatban. Ez a mechanizmus segíthet megmagyarázni a megfigyelt testsúlyszabályozási hatásokat.
A szöveti korlátok miatt nem tudtuk közvetlenül mérni a szétkapcsolási fehérjeszinteket a zsírszövetben a fehérjeszint változásának megerősítése érdekében.
Ez a tanulmány bizonyos korlátokkal rendelkezik. A tanulmány egyik korlátja a stevia kontrollként való használata.
Olyan kontroll édesítőszert próbáltunk használni, amely egyszerre gyakori és többnyire inert.
Mivel ezek a termékek nagyon eltérőek, lehetetlen biztosnak lenni abban, hogy az allulóz és a stevia alkalmazott dózisai „egyenlőek”.
Ennek megfelelően mindkettőből olyan dózisokat használtunk, amelyeket korábban már alkalmaztak [ 12 , 26 ].
Fontos megjegyezni, hogy míg a stevia kimutathatóan serkenti a GLP-1 szekréciót sejtkultúrában, rágcsálóknál vagy embereknél ilyen bizonyítékról nem tudunk.
Ez arra utal, hogy az allulózzal ebben a vizsgálatban megfigyelt előnyök egy része a GLP-1 felszabadulására lehet specifikus.
Továbbá a stevia ideális kontroll ebben a vizsgálatban, tekintettel a korábbi bizonyítékokra, amelyek arra utalnak, hogy a stevia a vízhez képest nincs hatással a súlygyarapodás mutatóira [ 27 ].
Meg kell azonban jegyezni a csak vizet fogyasztó csoport hiányát.
Egy második korlát a májra és a vesére vonatkozó szövettani adatok hiánya.
Bár eredményeink az allulóz-kiegészítés jóindulatú hatására utalnak a vese és a máj tápanyag-raktározása, valamint a máj esetében az enzimek tekintetében, a szövettani összehasonlítások nagyobb betekintést nyújtottak volna e szövetek állapotába.
Rendkívül fontos olyan élelmiszer-összetevők keresése, amelyek enyhíthetik a kedvezőtlen anyagcsere-állapotokat anélkül, hogy veszélyeztetnék az étrendi elégedettséget.
Új adatok szolgáltatásával és korábbi munkák alátámasztásával tanulmányunk azt bizonyítja, hogy az allulóz-kiegészítés a vízmegvonás kontextusában olyan módon modulálhatja a testsúlyt, az ételfogyasztást és az anyagcsere-paramétereket, ami elősegíti a jobb anyagcsere-egészségügyet.
5. Következtetések
Ezek az eredmények rávilágítanak az allulóz funkcionális étrend-kiegészítőként való felhasználásának lehetőségére, amely hatékonyan javíthatja az anyagcsere-egészségügyi eredményeket, például az inzulinrezisztenciát, a testsúlyt és egyebeket, mindezt anélkül, hogy potenciálisan nehéz étrendi változtatásokat kényszerítene ki.
További kutatásokra van szükség az allulózbevitel hosszú távú következményeinek és az anyagcsere-betegségek megelőzésére és kezelésére szolgáló étrendi stratégiákban való alkalmazásának feltárására.
Szerzői hozzájárulások
Konceptualizáció, BTB, PRR, JAA, RJJ és KBC; módszertan, KBC, MJS, MSH, IJK, DPD, APK, NB, DMD, NGN, PRR és BTB; szoftver, KBC, MJS, MSH és IJK; formális elemzés, KBC, PRR, RJJ és BTB; vizsgálat, KBC, MJS, MSH, IJK, PRR és BTB; források, PRR és BTB; adatkezelés, KBC és BTB; írás – eredeti vázlat elkészítése, BTB; írás – áttekintés és szerkesztés, Minden szerző; felügyelet, PRR és BTB; projektadminisztráció, BTB; finanszírozás megszerzése, BTB Minden szerző elolvasta és elfogadta a kézirat közzétett változatát.
Intézményi Felülvizsgálati Testület Nyilatkozata
Az állatkísérleti protokollt a Brigham Young Egyetem Etikai Bizottsága hagyta jóvá (23-1222; jóváhagyva: 2023. december 13.).
Adatok elérhetőségére vonatkozó nyilatkozat
Adatok kérésre elérhetők.
Finanszírozási kimutatás
Ezt a kutatást az Anderson Advanced Ingredients által a Brigham Young Egyetemnek odaítélt, R0602714 számú szponzorált kutatási megállapodás finanszírozta.
Lábjegyzetek
Jogi nyilatkozat/Kiadói megjegyzés: A kiadványokban található állítások, vélemények és adatok kizárólag az egyes szerző(k) és közreműködő(k) véleményét tükrözik, és nem az MDPI és/vagy a szerkesztő(k) véleményét. Az MDPI és/vagy a szerkesztő(k) elhárítanak felelősséget a tartalomban hivatkozott ötletekből, módszerekből, utasításokból vagy termékekből eredő személyi sérülésekért vagy anyagi károkért.
Referenciák
1. Hossain A., Yamaguchi F., Matsuo T., Tsukamoto I., Toyoda Y., Ogawa M., Nagata Y., Tokuda M. Ritka cukor D-allulóz: Potenciális szerep és terápiás monitorozás az elhízás és a 2-es típusú cukorbetegség fenntartásában. Pharmacol. Ther. 2015;155:49–59. doi: 10.1016/j.pharmthera.2015.08.004. [ DOI ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
2. Lanaspa MA, Sanchez-Lozada LG, Choi YJ, Cicerchi C., Kanbay M., Roncal-Jimenez CA, Ishimoto T., Li N., Marek G., Duranay M. és munkatársai. A húgysav mitokondriális oxidatív stressz generálásával májzsírosodást okoz: Potenciális szerepe a fruktózfüggő és -független zsírmájban. J. Biol. Chem. 2012;287:40732–40744. doi: 10.1074/jbc.M112.399899. [ DOI ] [ PMC szabad hozzáférésű cikk ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
3. Preechasuk L., Luksameejaroenchai C., Tangjittipokin W., Kunavisarut T. Az allulózfogyasztás rövid távú hatásai a glükóz homeosztázisra, az anyagcsere-paraméterekre, az inkretinszintre és a gyulladásos markerekre 2-es típusú cukorbetegségben szenvedő betegeknél: kettős vak, randomizált, kontrollált, keresztezett klinikai vizsgálat. Eur. J. Nutr. 2023;62:2939–2948. doi: 10.1007/s00394-023-03205-w. [ DOI ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
4. Niibo M., Kanasaki A., Iida T., Ohnishi K., Ozaki T., Akimitsu K., Minamino T. A d-allulóz védelmet nyújt a diabéteszes nefropátia progressziója ellen Otsuka Long-Evans Tokushima 2-es típusú cukorbetegségben szenvedő zsíros patkányokban. PLoS ONE. 2022;17:e0263300. doi: 10.1371/journal.pone.0263300. [ DOI ] [ PMC szabad hozzáférésű cikk ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
5. Iida T., Hayashi N., Yamada T., Yoshikawa Y., Miyazato S., Kishimoto Y., Okuma K., Tokuda M., Izumori K. A vékonybélben felszívódó d-pszikóz energiává alakításának elmulasztása és alacsony vastagbélbeli fermentálhatósága emberekben. Metab. Clin. Exp. 2010;59:206–214. doi: 10.1016/j.metabol.2009.07.018. [ DOI ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
6. Japar S., Fukunaga K., Kobayashi T., Imachi H., Sato S., Saheki T., Ibata T., Yoshimura T., Soh KL, Ong SL és mások. Kísérleti tanulmány a D-allulóz hatásáról a posztprandiális glükózszintre 2-es típusú cukorbetegségben szenvedő betegeknél a ramadáni böjt alatt. Diabetol. Metab. Syndr. 2022;14:86. doi: 10.1186/s13098-022-00856-3. [ DOI ] [ PMC szabad hozzáférésű cikk ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
7. Franchi F., Yaranov DM, Rollini F., Rivas A., Rivas Rios J., Been L., Tani Y., Tokuda M., Iida T., Hayashi N. és mások. A D-allulóz hatása a glükóz toleranciára és az inzulinválaszra standard orális szacharóz terhelésre: Egy prospektív, randomizált, keresztezett vizsgálat eredményei. BMJ Open Diabetes Res. Care. 2021;9:e001939. doi: 10.1136/bmjdrc-2020-001939. [ DOI ] [ PMC szabad hozzáférésű cikk ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
8. Yuma T., Tokuda M., Nishimoto N., Yokoi H., Izumori K. Allulóz az étkezés utáni vércukorszint csökkentésére egészséges emberekben: Szisztematikus áttekintés és metaanalízis. PLoS ONE. 2023;18:e0281150. doi: 10.1371/journal.pone.0281150. [ DOI ] [ PMC szabad hozzáférésű cikk ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
9. Iwasaki Y., Sendo M., Dezaki K., Hira T., Sato T., Nakata M., Goswami C., Aoki R., Arai T., Kumari P. és társai. A GLP-1 felszabadulása és a vagus afferens aktiválása közvetíti a D-allulóz jótékony metabolikus és kronoterápiás hatásait. Nat. Commun. 2018;9:113. doi: 10.1038/s41467-017-02488-y. [ DOI ] [ PMC ingyenes cikk ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
10. Yao H., Zhang A., Li D., Wu Y., Wang CZ, Wan JY, Yuan CS A GLP-1 receptor agonisták összehasonlító hatékonysága a glikémiás kontroll, a testsúly és a lipidprofil tekintetében 2-es típusú cukorbetegség esetén: Szisztematikus áttekintés és hálózati metaanalízis. BMJ. 2024;384:e076410. doi: 10.1136/bmj-2023-076410. [ DOI ] [ PMC szabad hozzáférésű cikk ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
11. Ryan D., Acosta A. GLP-1 receptor agonisták: Nem glikémiás klinikai hatások a fogyásban és azon túl. Elhízás. 2015;23:1119–1129. doi: 10.1002/oby.21107. [ DOI ] [ PMC szabad hozzáférésű cikk ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
12. Pratchayasakul W., Jinawong K., Pongkan W., Jaiwongkam T., Arunsak B., Chunchai T., Tokuda M., Chattipakorn N., Chattipakorn SC Nemcsak a metformin, hanem a D-allulóz is enyhíti az anyagcserezavarokat és a kognitív hanyatlást prediabéteszes patkányokban. Nutr. Neurosci. 2022;25:1115–1127. doi: 10.1080/1028415X.2020.1840050. [ DOI ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
13. Walton CM, Jacobsen SM, Dallon BW, Saito ER, Bennett SLH, Davidson LE, Thomson DM, Hyldahl RD, Bikman BT A ketonok eltérő változásokat idéznek elő a zsírszövet mitokondriális bioenergetikájában. Int. J. Mol. Sci. 2020;21:6255. doi: 10.3390/ijms21176255. [ DOI ] [ PMC szabad hozzáférésű cikk ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
14. Curtis KL, Homer KM, Wendt RA, Stapley BM, Clark ET, Harward K., Chang A., Clarke DM, Arroyo JA, Reynolds PR A passzív dohányzás (SHS) utáni gyulladásos citokintermelést részben a RAGE-jelátvitel közvetíti. Int. J. Mol. Sci. 2023;24:15645. doi: 10.3390/ijms242115645. [ DOI ] [ PMC szabad hozzáférésű cikk ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
15. Liu B., Gou Y., Tsuzuki T., Yamada T., Iida T., Wang S., Banno R., Toyoda Y., Koike T. A d-allulóz javítja az állóképességet és a kimerültség utáni regenerálódást hím C57BL/6J egerekben. Nutrients. 2022;14:404. doi: 10.3390/nu14030404. [ DOI ] [ PMC szabad hozzáférésű cikk ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
16. Ludwig DS, Ebbeling CB, Bikman BT, Johnson JD Szénhidrát-inzulin modell tesztelése egerekben: Az elsődleges hiperinzulinémia, az inzulinrezisztencia és a metabolikus diszfunkció megkülönböztetésének fontossága. Mol. Metab. 2020;35:100960. doi: 10.1016/j.molmet.2020.02.003. [ DOI ] [ PMC szabad hozzáférésű cikk ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
17. Zaletel J., Barlovic DP, Prezelj J. Adiponektin-leptin arány: Hasznos becslés az inzulinrezisztenciára 2-es típusú cukorbetegségben szenvedő betegeknél. J. Endocrinol. Investig. 2010;33:514–518. doi: 10.1007/BF03346639. [ DOI ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
18. Daniel H., Hauner H., Hornef M., Clavel T. Allulóz az emberi étrendben: Az ismertek és az ismeretlenek. Br. J. Nutr. 2022;128:172–178. doi: 10.1017/S0007114521003172. [ DOI ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
19. Hossain A., Yamaguchi F., Hirose K., Matsunaga T., Sui L., Hirata Y., Noguchi C., Katagi A., Kamitori K., Dong Y. és társai. A ritka cukor D-pszicóz megakadályozza a cukorbetegség progresszióját és kialakulását a T2DM modellben, az Otsuka Long-Evans Tokushima zsíros patkányokban. Drug Des. Dev. Ott. 2015;9:525–535. doi: 10.2147/DDDT.S71289. [ DOI ] [ PMC ingyenes cikk ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
20. Shintani T., Yamada T., Hayashi N., Iida T., Nagata Y., Ozaki N., Toyoda Y. Ritka cukorszirup, amely d-allulózt, de nem magas fruktóztartalmú kukoricaszirupot tartalmaz, részben a máj glükokináz transzlokációján keresztül fenntartja a glükóz toleranciát és az inzulinérzékenységet Wistar patkányokban. J. Agric. Food Chem. 2017;65:2888–2894. doi: 10.1021/acs.jafc.6b05627. [ DOI ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
21. Han Y., Han HJ, Kim AH, Choi JY, Cho SJ, Park YB, Jung UJ, Choi MS A d-allulóz-kiegészítés normalizálta a testtömeget és a zsírréteg tömegét diétával indukált elhízott egerekben az izokalorikus tápláltsági állapot melletti lipid-anyagcsere szabályozásán keresztül. Mol. Nutr. Food Res. 2016;60:1695–1706. doi: 10.1002/mnfr.201500771. [ DOI ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
22. Noronha JC, Braunstein CR, Glenn AJ, Khan TA, Viguiliouk E., Noseworthy R., Blanco Mejia S., Kendall CWC, Wolever TMS, Leiter LA és mások. Kis dózisú fruktóz és allulóz hatása a posztprandiális glükózanyagcserére 2-es típusú cukorbetegségben: kettős vak, randomizált, kontrollált, akut táplálási, ekvivalencia vizsgálat. Diabetes Obes. Metab. 2018;20:2361–2370. doi: 10.1111/dom.13374. [ DOI ] [ PMC szabad hozzáférésű cikk ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
23. Hira T., Trakooncharoenvit A., Taguchi H., Hara H. A glükóztolerancia javítása glukagonszerű peptid-1 felszabadító aktivitással rendelkező élelmiszer-tényezők által. Int. J. Mol. Sci. 2021;22:6623. doi: 10.3390/ijms22126623. [ DOI ] [ PMC szabad hozzáférésű cikk ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
24. Kishida K., Iida T., Yamada T., Toyoda Y. D-fruktóz izomerek, D-allulóz, D-szorbóz és D-tagatóz intesztinális felszívódása patkányokban az 5-ös típusú glükóz transzporteren (GLUT5), de nem a nátriumfüggő glükóz kotranszporteren 1 (SGLT1) keresztül. Br. J. Nutr. 2023;130:1852–1858. doi: 10.1017/S0007114523001113. [ DOI ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
25. Dallon BW, Parker BA, Hodson AE, Tippetts TS, Harrison ME, Appiah MMA, Witt JE, Gibbs JL, Gray HM, Sant TM és mások. Az inzulin szelektíven csökkenti a mitokondriális szétkapcsolódást barna zsírszövetben egerekben. Biochem. J. 2018;475:561–569. doi: 10.1042/BCJ20170736. [ DOI ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
26. Nunez Martinez P., Arguelles Luis J., Perillan Mendez C. Stevia preferenciák Wistar patkányokban. Psicothema. 2016;28:442–447. doi: 10.7334/psicothema2015.244. [ DOI ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
27. Tabarelli Z. Vizes kivonat hatása az éretlen Wistar patkányok testsúlyára, táplálék- és folyadékbevitelére. Logo Ciência Nat. 1986;8:73–80. doi: 10.5902/2179460X25443. [ DOI ] [ Google Scholar ]
